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進行 ELISA 前制備樣品的提示
閱讀：878 發(fā)布時間：2021-11-4樣品制備方法
細胞培養(yǎng)物上清液
將培養(yǎng)基移至離心管， 4℃， 1,500 rpm 離心 10 分鐘。
立即進行上清液的分裝（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數
細胞提取物
將組織培養(yǎng)板放置在冰上
吸出培養(yǎng)基并用預冷PBS 輕輕洗滌細胞一次
吸出 PBS ，加入100 mm 培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液
收集細胞至在傾斜板中，然后移至經過預冷的離心管中。
短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘
在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內容物
將上清液（這里是指可溶性細胞提取物）分裝至預冷的離心管中，并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復凍融次數。
條件培養(yǎng)基
將細胞接種到*（含血清）生長培養(yǎng)基中，使細胞增殖達到一定的融合率。
棄去培養(yǎng)基，數毫升預熱PBS 小心洗滌。重復洗滌步驟。
棄去PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基。
孵育 1-2 天。
將培養(yǎng)基移至離心管， 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。
立即分裝上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
乳汁
收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。
分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
血漿
將全血收集到含抗凝劑的管中，例如 BD 抗凝真空采血管（目錄號：363080/363080）或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積。
4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。
立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
尿液
收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。
等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少凍融循環(huán)次數
唾液
收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。
立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
血清
將全血收集到未經處理的測試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如 BD 血清用真空采血管（目錄號：367812)。
在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘。
4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。
立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
組織提取物
用干凈的工具解剖組織，最好在冰上、盡快進行，以防止被蛋白酶降解。
將組織置于圓底的微量離心管中，并浸入液氮中進行“速凍"。將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)使用或放置在冰上進行直接勻漿。
對于約 5 mg 的組織片，可向管中添加約 300 µl *提取緩沖液（查看細胞/組織提取緩沖液配方），然后用電動勻漿器勻漿。
清洗刀片兩次，每次清洗使用 300µl *提取緩沖液，然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）。
4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質提取物）分裝至新、預冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。