化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
滬鼎進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品分析制備細(xì)菌蛋白質(zhì)樣本，八步驟決定實驗結(jié)果
閱讀：1289 發(fā)布時間：2014-4-8 今天為止，就快要算上是本月的三分之一啦，這時間如流水，快得讓人顧之不及。然而新的一天中，上海滬鼎會分享新的實驗，我公司每周都會有的公司動態(tài)文章發(fā)布，歡迎朋友們關(guān)注。下面我們就進(jìn)入今天的主題，來看進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品分析制備細(xì)菌蛋白質(zhì)樣本，八步驟決定實驗結(jié)果
實驗中需要用到的物品：
1、表達(dá)待檢測蛋白質(zhì)的細(xì)菌
2、50mmol/L Tris·Cl (pH7.4)
3、2×SDS凝膠加樣緩沖液
100mmol/L Tris·Cl (pH 6.8)
200mmol/L 二硫蘇糖醇（DTT）
4% SDS(電泳級)
0.2% 溴酚藍(lán)
20% 甘油
不含有二硫蘇糖醇（DTT）的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，臨用前須從1mol/L二硫蘇糖醇儲存液現(xiàn)用現(xiàn)加于上述緩沖液中。
4、臺式離心機(jī)
5、超聲破碎儀
6、水浴箱
7、渦漩振蕩器
8、加樣器與吸頭等
實驗八步驟：
1、表達(dá)靶蛋白大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)適當(dāng)時間后，用微量離心機(jī)以12 000g離心30s，收集1ml培養(yǎng)的菌體；
2、吸取培養(yǎng)液，加入0.5ml用冰預(yù)冷的50mmol/L Tris·Cl (pH7.4)，振蕩沉淀的菌體，使之復(fù)懸，用微量離心機(jī)于0℃以12 000g離心30s回收菌體；
3、再次吸出上清液，小心地吸凈管壁上的液滴，盡可能使沉淀物不帶有殘留液體；
4、加入25ul水，振蕩使沉淀復(fù)懸，一旦菌體分散開來，立即加入25ul 2×SDS凝膠加樣緩沖液，繼續(xù)振蕩20s；
5、樣品在沸水浴中放置5min；
6、采用帶有浸入尖頭或能在冷卻杯中同時處理多個樣品的超聲處理儀對DNA進(jìn)行剪切，根據(jù)所用超聲處理儀的輸出功率及其設(shè)定狀態(tài)，以zui大功率處理0.5~2min應(yīng)能有效地將裂解液粘度降至可控水平；
7、樣品于室溫以12 000g離心10min，將上清液移至另一管中，棄沉淀物；
8、吸取經(jīng)剪切或超聲處理的樣品25ul電泳，剩余樣品保存于–20℃?zhèn)溆谩?br /> 新的一個月中，我公司上新了進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品，現(xiàn)貨供應(yīng)，了解詳細(xì)信息與*格等等都可以直接來的給我公司業(yè)務(wù)員，也可以在本留言的，上海滬鼎生物真的非常感謝朋友們的支持。