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用小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的雙位點(diǎn)一步法

閱讀:1339          發(fā)布時(shí)間:2014-3-24

    對elisa實(shí)驗(yàn)有了解的朋友們知道,它可以用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三種(固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體、酶作用的底物)必要的試劑,我們根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。
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 在雙抗體夾心法測定抗原時(shí),如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,則在測定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不但簡化了操作,縮短了反應(yīng)時(shí)間,如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中,應(yīng)注意鉤狀效應(yīng),類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時(shí),過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成夾心復(fù)合物,所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
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