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實(shí)驗(yàn)步驟
01
基質(zhì)膠準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前一天，從冷凍冰箱內(nèi)取出CeturegelTM基質(zhì)膠并置于4℃冰箱過(guò)夜融化，同時(shí)對(duì)所使用的耗材預(yù)冷處理。
實(shí)驗(yàn)前將CeturegelTM基質(zhì)膠始終放置在冰盒中。
打開血管生成載玻片滅菌包裝，取出載玻片。
向每孔內(nèi)加入10 μl CeturegelTM基質(zhì)膠，注意加入CeturegelTM基質(zhì)膠時(shí)槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方，防止有基質(zhì)膠流經(jīng)上孔而留下殘膠。
02
凝膠
首先蓋上載玻片的蓋子，準(zhǔn)備一個(gè)10 cm的培養(yǎng)皿，放入浸過(guò)水的紙巾，制成一個(gè)濕盒。
將載玻片放入培養(yǎng)皿中，蓋上培養(yǎng)皿蓋。
將整個(gè)培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱中，靜置30min左右等待膠凝結(jié)，同時(shí)準(zhǔn)備細(xì)胞懸液。
03
細(xì)胞鋪板
將消化后的細(xì)胞制備成密度為2*105 cells/ml細(xì)胞懸液，充分混勻。
將含有已經(jīng)凝固成膠狀的血管載玻片取出。
每孔加入50μl的細(xì)胞懸液，注意保持槍頭垂直在上孔的上方，不要接觸下孔的凝膠。
加入細(xì)胞培養(yǎng)基，蓋上蓋，靜置，一段時(shí)間后，所有細(xì)胞都會(huì)沉下去落在基質(zhì)膠的表面。
04
圖像采集
小心移除孔內(nèi)培養(yǎng)基，切勿碰觸膠或者細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋鈣黃綠素使其終濃度為6~8 µg/ml。
加入細(xì)胞染液使其*浸沒細(xì)胞，室溫，避光孵育30~40分鐘。
PBS清洗三次，注意PBS要緩緩加入上孔，以免沖擊掉細(xì)胞。
使用Ex=485 nm，Em=529 nm波長(zhǎng)進(jìn)行熒光觀察
05
結(jié)果統(tǒng)計(jì)
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 編號(hào) | 規(guī)格 |
基本濃度 | CeturegelTM Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
CeturegelTM Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生長(zhǎng)因子 | CeturegelTM Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
CeturegelTM Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高濃度 | CeturegelTM Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
CeturegelTM Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
CeturegelTM Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干細(xì)胞專用 | CeturegelTM Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
類器官專用 | CeturegelTM Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
