高活性Wnt3a，經(jīng)多種類器官培養(yǎng)驗(yàn)證
類器官是在體外建立的與體內(nèi)組織或器官高度相似的一種三維模型，在疾病建模、器官再生和個性化治療領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。類器官的培養(yǎng)需要多種細(xì)胞因子的維持，其中Wnt3a是的因子之一，在大多數(shù)組織來源的類器官培養(yǎng)中起關(guān)鍵作用。
Wnt家族是一個巨大的分泌蛋白家族，該家族包含19種人類蛋白質(zhì)，包括Wnt1、Wnt2、Wnt2b（Wnt13）、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a（Wnt14）、Wnt9b（Wnt14b）、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11 和 Wnt16。該家族高度保守，富含半胱氨酸。Wnts 通過與細(xì)胞膜受體結(jié)合和/或通過與相鄰細(xì)胞膜受體結(jié)合介導(dǎo)Wnt信號通路。Wnt信號通路可分為經(jīng)典通路和非經(jīng)典通路。一種參與β-catenin介導(dǎo)的經(jīng)典信號通路，包括Wnt1，Wnt2，Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt8、Wnt8b和Wnt10a；另一種即不依賴β-catenin的非經(jīng)典信號通路，包括Wnt4，Wnt5a，Wnt6和Wnt11。Wnt3a作為Wnt家族有代表性的信號蛋白，其分布廣泛，在調(diào)節(jié)多效性細(xì)胞功能（包括自我更新、增殖、分化和運(yùn)動）中起關(guān)鍵作用。Wnt信號通路是一個復(fù)雜的蛋白質(zhì)作用網(wǎng)絡(luò)，其功能最常見于胚胎發(fā)育和癌癥，但也參與成年動物的正常生理過程。Wnt3a與其受體卷曲 (Fz) 蛋白和脂蛋白受體相關(guān)蛋白 (LRP5/6) 共受體結(jié)合，然后激活支架蛋白 Disheveled (Dvl) ，并引起“破壞復(fù)合物"的解離（破壞復(fù)合物由酪蛋白激酶 1 (CK1)、糖原合酶激酶-3β (GSK-3β) 和支架蛋白腺瘤性結(jié)腸息肉 (APC)、Axin1 和 Axin2 形成的）。 “破壞復(fù)合物"的解離穩(wěn)定細(xì)胞質(zhì)中游離狀態(tài)的β-Catenin蛋白，細(xì)胞質(zhì)中積累的β-Catenin蛋白進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF家族的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，從而啟動下游靶基因（如c-myc、Cyclin D1等）的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)后續(xù)的細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)生。我們可以把Wnt信號通路簡單概括為：Wnt3a→FZD→DVL→復(fù)合體解散→β-Catenin入核→TCF/LEF→下游基因轉(zhuǎn)錄。沒有Wnt3a，β-連環(huán)蛋白不會在細(xì)胞質(zhì)中積累，因?yàn)椤捌茐膹?fù)合物"通常會降解它，通過將β-連環(huán)蛋白靶向泛素化而降解β-連環(huán)蛋白，隨后將其送至蛋白酶體進(jìn)行消化，無法入核啟動下游基因轉(zhuǎn)錄。Wnt/β-catenin信號通路是生物體進(jìn)化中最保守的通路之一，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、分化、極性形成、神經(jīng)發(fā)育和癌變中起關(guān)鍵作用。
圖1. Wnt3a的經(jīng)典信號通路（源自參考文獻(xiàn)）
Wnt3a是類器官構(gòu)建的培養(yǎng)因子之一，其高活性、批次間穩(wěn)定、無污染和無血清制備是類器官實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。Wnt3a目前已用于腸、胃類、胰腺、肝臟、甲狀腺、食道及神經(jīng)系統(tǒng)等類器官培養(yǎng)。為助力科研和藥企人員針對Wnt3a在類器官形成，以及在腫瘤中的臨床應(yīng)用研究，YEASEN推出Wnt3a高活性蛋白（Cat: 92276ES）產(chǎn)品，助力類器官培養(yǎng)。
SDS-PAGE
Figure 2. Human wnt3a Protein on SDS PAGE under reduced condition. The purity is greater
Cell Based Assay
Figure 3. Measured by its ability to induce Topflash reporter activity in HEK293T human embryonic kidney cells. The ED50 for this effect is 25 ng/mL.
Organoid Culture
Figure 4. Human intestinal organoids were cultured with Wnt3a . The organoids showed good morphology.
1.Zheng W J, Yao M,2, Fang M, et al . Oncogenic Wnt3a: A Candidate Specific Marker and Novel Molecular Target for Hepatocellular Carcinoma[J].Journal of cancer,2019.
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