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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11146ES50 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Hifair® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix
產品名稱
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hifair® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix | 11146ES50 | 50 T | 1563.00 |
Hifair® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix | 11146ES70 | 200 T | 5863.00 |
產品描述
Hifair® Ⅴ Multiplex One Step RT-qPCR Probe Mix是以RNA為模板進行多重定量PCR反應的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。本試劑盒利用耐熱Hifair® Ⅴ Reverse Transcriptase高效合成*鏈cDNA，并以此為模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase配合專門針對多重反應優化的Buffer，能夠在保證引物擴增效率的同時，進行多達五重的反應。
本試劑盒以預混液形式提供，2×Hifair® Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix包含優化的緩沖體系，添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應擴增效率的因子。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
11146ES50 (50 T) | 11146ES70 (200 T) | ||
11146-A | 2×Hifair® Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix | 500 μL | 2 mL |
11146-B | RNase free ddH2O | 500 μL | 2 mL |
運輸與保存方式
冰袋運輸。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
反應體系（以20 μL為例）
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2×Hifair® Ⅴ One Step mRT-qPCR Mix | 10 | 1× |
Primer Mix (10 μM) | 0.4 | 0.2 μM |
Probe Mix (10 μM) | 0.2 | 0.1 μM |
模板 RNA | Total RNA 1 pg-1 μg |
|
RNA Free H2O | to 20 μL |
|
【注】：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
a）引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.2μM，也可以根據情況在0.1-1.0μM間進行調整。
b）探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據具體情況在50-300 nM間調整。
c）模板稀釋：qPCR靈敏度*，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
d）反應體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
e）體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管，推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
f） 參比ROX：ROX內參請另外購買Hieff® 50×High Rox（Cat#: 11145-C）或Hieff® 50×Low Rox（Cat#: 11145-D）。
標準擴增程序
| 反應階段 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
1 | 逆轉錄 | 50℃a | 15 min | 1 |
2 | 預變性 | 95℃ | 30sec | 1 |
3 | 擴增反應 | 95℃ | 10 sec | 40 |
60℃b | 30 secc |
【注】
a）逆轉錄：對于一些復雜模板或者高GC含量的RNA模板，可將逆轉錄溫度調整至55℃，有利于提高擴增效率。
b）擴增反應：擴增反應溫度根據設計的引物Tm值進行調整。
c）熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據短時間限制進行設置。
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