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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 12 KU |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11301ES12 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Hifair® V Reverse Transcriptase
第五代耐熱逆轉錄酶（無甘油版）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格 |
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐熱逆轉錄酶（無甘油版） | 11301ES12 | 12 KU | 1952.00 |
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐熱逆轉錄酶（無甘油版） | 11301ES75 | 300 KU | 28652.00 |
產品描述
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎上通過基因工程技術得到的全新逆轉錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
11301ES12 (12 KU) | 11301ES75 (300 KU ) | ||
11301-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 20 μL | 500 μL |
產品應用
一步法RT-qPCR；基因克隆；熒光定量。
活性定義
以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的電泳譜帶不發生變化。
核酸內切酶殘留檢測：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的電泳譜帶不發生變化。
RNase殘留檢測：200 U本酶和1 μg小鼠肝臟總RNA，37℃下孵育1 h，RNA電泳譜帶不發生變化。
運輸與保存方法
冰袋運輸。4℃保存。效期6個月。
注意事項
1）請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解；
3）為保證高效率逆轉錄，建議使用高質量的RNA樣本；
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
第—鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第—鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
or 1 μL | |
or 1 μL | |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 13 μL |
5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 200 U |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 20 μL |
3. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 15-30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至50-55℃。
3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活。
※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
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HB200407
