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CRISPR/Cas9 質粒-New

閱讀:3204      發布時間:2015-10-27
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Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 質粒-New

CRISPR/Cas9基因敲除質粒

1)每個Knockout 質粒產品設計為3個質粒,確保對特定基因識別和剪切效率達到zui大。每個質粒編碼*的20個核苷酸,序列來自GeCKO文庫。

2Cas9/gRNA 復合體與靶DNA PAMNGG)位點結合,并解旋DNA

gRNAPAM位點附件的靶位點特異結合。

3)通過3gRNA的向導,Cas93個特定位點對目的基因的5’外顯子進行剪切。

二、HDR 同源修復質粒

1)每個HDR產品包含了3種質粒,這三種質粒對相應的CRISPR/Cas9敲除質粒導致的缺口特異性修復。

2HDR質粒為DSB提供特定的修復模板

3)每個HDR質粒包含兩個800堿基對同源臂,可特異的與相應的cas9誘導的雙鏈DNA破壞位點周圍的基因組DNA結合。

4)與敲除質粒共轉染時,HDR質粒的puro基因,用于篩選穩定的敲除克隆。

5)每個嘌呤霉素抗性基因兩側各有一個Loxp位點,便于Cre載體進一步處理。

三、雙切口酶質粒(Double Nickase Plasmids

1)每個雙切口酶質粒由一對各自編碼 D10A突變型Cas9核酸酶和特異性20nt 組成,與CRISPR/Cas9敲除質粒相比,具有更高的特異性。

2)成對gRNA序列設計為大約5-20個堿基對的偏移,所形成的DNA雙切口被識別為功能性雙鏈斷裂。

3)每個casn/sgNA復合物在與向導RNA互補的DNA鏈僅產生一個切口。

4)使用成對的向導RNA可提高特異性且可zui低化脫靶效應。

四、CRISPR/dCas 激活質粒

1)用于激活內源基因的表達。包含三種質粒,幾個修飾組件形成協同激活介質(SAM)復合體,這個SAM復合體代表了迄今為止,zui有效的轉錄激活系統。

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