 | 重慶市華雅干細胞技術有限公司 |
13
15021010459
當前位置：首頁>>技術中心>>技術文章>>進口胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有2種
在線溝通：
顏先生 （經理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯系我時，
- 告知來自化工儀器網
- 個性化：
- www.hystemcell.cn
- 公司網站：
- https://www.ys-bio.cn/
進口胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有2種
閱讀：1318發布時間：2019-12-12
胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊法和酶解離法。下面一起來看下這兩種方法。
1、貼塊法
方法：動物經頸動脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內膜即內皮細胞迅速撕下中膜內、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養瓶加入20% 胎牛血清的培養液，再放回培養箱內靜止培養4天。4天后可見細胞從組織中遷移游出。
不同動物血管結構有差異，豬和猴較易操作，但小動物如兔、鼠因其血管小，血管壁薄等特點，使之難以分離。另外組織塊太薄，不易粘附培養基，也使細胞較難生長。為了保證培養的成功，應注意：
①種植組織塊的數目，如75cm2的長頸瓶組織塊不得少于30;
②根據培養細胞的種屬加入適量的不同血清，一般可加入牛血清，若小牛血清增殖效果差，應加胎牛血清(FBS)，通常濃度為10%～20%;
③培養基的選擇：常用的有DMEM，M199培養基。培養兔的平滑肌細胞用DMEM效果較好。
2、酶解離法
沿動脈縱軸切開后，刮除內皮細胞撕下中膜的內2/3，注意不要混入內皮細胞，將組織塊切成1-2mm2，放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養基中，37℃，0.5～1.5h。離心去上清，重復上述消化步驟，然后再離心(9000r,4min)，收集細胞，在5%～10%同種血清或HyClone胎牛血清的M199培養基中調整細胞數，然后轉入30～90mm培養皿中培養，對于兔子應加入高濃度的谷氨酰胺(0.2g/L)較佳。不同研究者在培養基、酶濃度以及消化時間等的選擇都有很大的差異。
綜上所述，貼塊法具有獲得平滑肌細胞純度高，量多，操作簡便的優點。但用貼塊法易使平滑肌細胞胞質內肌絲喪失，亞細胞器增加。相反，酶解離法，由于酶的作用使細胞間失去連接，細胞內肌絲含量豐富，保持收縮型狀態。培養平滑肌細胞常取材于兔、豬、鼠、猴的胸腹主動脈段。由于貼塊法和解離法處理方式不同，在細胞培養的zui初階段細胞形態和性質存在差異。隨著培養時間的延長，培養環境趨于一致，細胞特性上也趨于近似。
重慶市華雅干細胞技術有限公司主營產品：Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養基,StemRD生長分化因子
化工儀器網 設計制作，未經允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.mcstair.com, All rights reserved.
以上信息由企業自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責，化工儀器網對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示：為規避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
