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技術文章
EMSA紫外交聯時間是多少
點擊次數：1637 發(fā)布時間：2023-4-7
EMSA中紫外交聯時間怎么確定？將尼龍膜置于濾紙上干燥片刻，在紫外交聯儀中將轉有DNA的一面向上用120mJ/cm2能量輻照交聯，紫外交聯儀的紫外傳感器會根據當前紫外交聯儀的紫外線強度自動計算輻照時間，當輻照能量達到設定值時候，會自動停止輻照。
紫外照射的目的在于使DNA 中的一小部分T 與膜表面帶正電的氨基基團之間形成交聯(Church and Gilbert 1984)。紫外照射不能過度,否則將造成堿基T之間發(fā)生共價結合而降低雜交信號。交聯時將膜上帶有DNA的一面朝向紫外光源。
EMSA紫外交聯時間設置方法：
紫外交聯儀設置時間的步驟：按壓智能紫外交聯儀UCL-3500操作面板上program按鍵，選擇時間模式，通過數字按鍵，輸入需要照射的時間，然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯時間就成功設置好了，按star按鍵，紫外交聯儀開始輻照，屏幕顯示倒計時時間，交聯時間結束后，交聯儀紫外燈自動停止運行。
EMSA紫外交聯能量
智能紫外交聯儀UCL-3500可用于Northern、EMSA blotting、EMSA等膜交聯,當使用254 nm波長、能量為120.0mJ/cm2交聯時,尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價鍵穩(wěn)定。
EMSA紫外交聯能量設置方法：
按壓智能紫外交聯儀操作面板上program按鍵，選擇能量模式(energy)，通過數字按鍵，輸入需要照射的能量（0.120J/cm2），然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯能量就成功設置好了，按star按鍵，紫外交聯儀開始輻照，屏幕顯示剩余能量，交聯時間結束后，交聯儀紫外燈自動停止運行。