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高質量RNA提取條件之二

2017-8-10 閱讀(3164)

1.選擇好的RNA分離方法

現有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡單也是安全的方法是柱式分離,如RNApure 因為操作簡單,時間短,純度高而受到大家的喜愛,RNApure不需要DNA酶消化DNA,節省了時間,避免RNA的降解,從而提高了產量;相對非柱式分離(如TRIZOL),去除蛋白及其他雜質干凈,提高了純度,對于細胞、組織、一般植物均非常適合。植物RNA的提取比較難抉擇,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質、次生代謝物含量的影響,一般用TRIZOL提取純度不高,而且很多植物用TRIZOL提取不出來。這時候可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等)和通用植物RNA提取試劑盒(適合絕大多數植物提取,包括:蘋果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹、杉樹、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍、牽?;ǖ龋?;非常值得一提的是血液(包括血清、血漿、腦脊液、其他液體)RNA的提取用TRIZOL和紅細胞裂解的方法效果都不好,紅細胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分,這個過程RNA很容易降解,推薦使用TRIpure LS 或者血液總RNA提取試劑盒。

2.消除環境RNase的污染

為了得到完整的、高品質RNA,在整個RNA制備過程中,當RNA離開強蛋白變性劑(如離液裂解液或酚)的保護時,避免引入新的RNase污染就非常關鍵。由于RNase存在,所以與純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。的表面,包括移液器、工作臺、玻璃器皿和制膠設備,都用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過,去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。一直使用無RNase的槍頭、試管和阿溶液,手套也應經常更換。

 3.提取好的RNA如何儲存

如果只是短期儲存,重懸的RNA應放置于-20°C;如果是長期儲存的話,就應該放置于-80°C。盡管重懸于水或緩沖液中的RNA也可以儲存在-80°C,但保存RNAlong中的RNA沉淀則更加穩定,可以長期保存。我們推薦將RNA溶液分裝在幾支管中。這會避免反復凍融損傷RNA,并預防偶然的RNase污染。

4.使用正確的細胞或組織儲存條件

在樣品用液氮瞬間凍結之后,應該儲存在-80°C,千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍,也會導致RNA的降解和損失。瞬間凍結的組織應該先在超低溫條件下先研磨成粉,然后置于裂解液中進行勻漿。



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