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島津應用：nSMOL前處理技術結合Skyline軟件
LCMS 技術分析蛋白藥物或者蛋白標記物，通常需要經過胰酶酶解過程，獲得的酶解混合物經過凈化后再分析。復雜生物基質例如血漿、血清中目標抗體藥物若采用傳統酶解方式或 Pellet 酶解方式，獲得的酶解產物均為多種肽段的混合物。結合 LCMS 分析的特點，在方法開發的過程中需要針對酶解的備選肽段進行 MRM 通道的篩選和優化，酶解產物越復雜在方法開發過程中所消耗的時間越長。隨著技術的發展，我們發現通過納米表面限制性和導向性酶解抗體藥物實現 Fab 區域的選擇性酶解技術（nSMOL）處理抗體，可以盡可能降低對非特異性區域例如保守區域的酶解，從而極大地減少了酶解肽段的數量，進一步的 LCMS 方法開發過程大為簡化。
與傳統的基于經驗篩選蛋白特征肽段的過程不同，島津公司將其超快速液相色譜-質譜聯用平臺和強大的 Skyline 定量蛋白質組學軟件集成一體。Skyline 軟件為蛋白質定量的研究工作提供了標準化的工作流程，使得方法開發工作不再過度依賴研究人員的經驗，降低了肽段篩選和 MRM 通道分析條件優化的復雜程度。
本文利用nSMOL前處理試劑包結合Skyline軟件，加速抗體藥物LCMS方法開發過程，僅在一個工作日就可以完成單個抗體藥物的 LC-MS/MS 方法的初步優化。在本實驗中篩選階段，貝伐珠單抗共有 9 個肽段具有典型色譜峰，其中 4 條肽段與貝伐珠單抗的 Fab 區域相關，而貝伐珠單抗具有代表性的特異性肽段集中于 Fab 區域，4 條 Fab 區域的肽段響應遠高于其他肽段；曲妥珠單抗共有 10 個肽段典型色譜峰，其中 8 條肽段與貝伐珠單抗的 Fab 區域相關，80%的肽段與抗體 Fab 區域相關。與傳統的 ELISA 方法需要制備特異性免疫試劑進行檢測消耗的時間比，本方法極大地縮短了方法開發的過程，更靈活快速應對抗體藥物和生物類似藥臨床前及臨床研究等不同階段生物分析的需求。
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