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一文讀懂阿膠定量“新標準”
導語
古語云“阿膠一碗，芝麻一盞，白米紅餡蜜餞。粉腮似羞，杏花春雨帶笑看。潤了青春，保了天年，有了本錢”。阿膠能補血滋陰、潤燥止血，自古為滋補上品。
阿膠系驢皮經煎煮濃縮成的固體膠。近年來，隨著驢皮貨源緊缺，市面上存在不法商販弄虛作假，以次充好，以牛皮、馬皮等下腳料冒充驢皮制作假冒偽劣阿膠的行徑，嚴重擾亂了阿膠市場。其他獸畜皮熬膠，也有補血止血的功能，但阿膠偽品的蛋白質成分及其含量和阿膠真品存在明顯不同，與驢皮膠使用效果相差甚遠。因此，掌握阿膠的真偽鑒別方法至關重要。
為了進一步規范阿膠產業發展，提升阿膠品質保障能力，國家藥典委在2019年發布關于“關于阿膠、海龍、海馬等國家藥品標準修訂草案的公示”和“關于阿膠國家藥品標準修訂草案的公示（第二次）”兩項公示稿，分別對阿膠【含量測定】和阿膠【鑒別】項下內容進行了修訂。其中阿膠【含量測定】項修訂幅度大，新增了“特征多肽”含量要求：
l 驢源多肽A1特征離子對：m/z469.25>712.30和m/z z469.25>783.40，
l 驢源多肽A2特征離子對：m/z618.35> 779.40和m/z618.35> 850.40，
l 按干燥品計算，“含特征多肽以驢源多肽A1（C41H68N12O13）和驢源多肽A2（C51H82N18O18）的總量計應不得少于0.17%”。
此外，在2012年藥典委頒布了《阿膠中牛皮源質量的補充檢驗方法》。2015版《中國藥典》中，明確規定使用液相色譜-串聯質譜法用于阿膠、龜甲膠、鹿角膠的鑒別。近，國家藥監局還頒布了《阿膠中豬皮源的補充檢驗方法》，在阿膠產品中應不得檢出豬皮源（新阿膠）成分。
島津參考以上標準和文獻報道，使用胰蛋白酶對阿膠、牛皮膠和豬皮膠等不同來源的明膠類物質進行酶切處理，通過島津LCMS-8045液相色譜質譜聯用儀(圖1)對特征多肽進行測定，從而實現阿膠與雜皮膠的鑒別與阿膠的定量。
圖 1 島津 LCMS-8045液相色譜質譜聯用儀
主要方法參數
色譜柱：
Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)
MRM參數：見表1
表1 MRM優化參數
對照藥材分析
采用超高效液相色譜-質譜聯用的方法，一次進樣，同時分析8種特征多肽，實現阿膠藥材的鑒別與定量。分析結果表明，阿膠、驢源多肽A1、驢源多肽A2、黃明膠、鹿角膠、龜甲膠、新阿膠、馬皮源多肽信噪比均大于10：1，*檢測要求。如下圖2（左右滑動查看全部內容）
圖2 阿膠等8種特征肽定性色譜圖
樣品測定
對阿膠樣品進行測定，黃明膠、鹿角膠、龜甲膠、新阿膠、馬皮源通道均未檢出；阿膠、驢源多肽A1、驢源多肽A2分離良好，峰形對稱，且信噪比均大于10：1。如下圖3（左右滑動查看全部內容）
圖3 阿膠定性定量肽段測量
總結
阿膠作為滋補佳品，消費者平時關注更多的是阿膠的功效。其實，無數“實驗猿”為了保證阿膠的真實與有效，默默地完成了大量阿膠藥材真偽鑒別與含量測定的工作。有了本文的方法，“實驗猿”可以一針進樣鑒別多種肽段，節省時間。除此之外，本方法加入了定量肽段，可以實現定性定量同時分析。
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參考文獻
[1] 阿膠的【鑒別】（2015版藥典第一部，189頁）
[2] 龜甲膠的【鑒別】（2015版藥典第一部，181頁）
[3] 鹿角膠的【鑒別】（2015版藥典第一部，322頁）
[4] 阿膠中豬皮源成分檢查項補充檢驗方法（BJY 201917）
[5] 阿膠中牛皮源質量的補充檢測方法（中檢院2012年標準）
[6] 阿膠【含量測定】公示稿
[7] 阿膠【鑒別】公示稿
[8] 杭寶建, 等. 超高效液相色譜-串聯質譜法測定阿膠中馬、牛、羊、豬、駱駝、鹿皮源成分[J]. 色譜, 2018(4):408-412.