細胞培養(yǎng)室無菌建設及注意事項如下：

一、無菌室建設

1. 結構與布局：

• 細胞培養(yǎng)室應包含更衣間、緩沖間和無菌操作間三個主要部分。

• 更衣間：供實驗人員更換衣服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。

• 緩沖間：位于更衣間與無菌操作間之間，用于放置恒溫培養(yǎng)箱及某些小型儀器，同時確保無菌操作間的無菌環(huán)境。

• 無菌操作間：專用于無菌操作和細胞培養(yǎng)。其大小應適當，頂部高度不超過2.5米，以保證紫外線的滅菌效果。墻壁應光滑不存在死角，便于清潔和消毒。

2. 設備與設施：

• 潔凈工作臺（超凈臺）：是細胞培養(yǎng)中必需的設備，利用空氣層流裝置排除工作臺面上的塵埃和微生物。主要有側流式（垂直式）和外流式（水平層流式）兩種。

• CO?培養(yǎng)箱：為細胞提供一個體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境，如適宜的溫度、CO?濃度和濕度等。

• 顯微鏡：用于觀察細胞的生長情況和污染狀況。

• 其他：還包括超純水機、單細胞懸液制備儀等設備。

二、注意事項

1. 無菌操作：

• 實驗人員進入無菌室前，應先關掉紫外燈，至少等待15分鐘后再進入。

• 進入無菌室前，需用肥皂或消毒液洗手消毒，并在緩沖間更換專用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。

• 實驗過程中，應定期用消毒劑擦拭臺面及操作臺上的物品，保持工作區(qū)域的清潔和無菌。

2. 材料準備：

• 使用無菌的哺乳牛血清，并在低溫下儲存。

• 使用新的、未污染的塑料制品和玻璃儀器。

• 準備足夠的消毒劑，如70%的乙醇、有效次氯酸鈉等，并正確配制和使用。

3. 通風與清潔：

• 實驗室應有良好的通風系統(tǒng)，確保空氣流通和減少污染。

• 定期清潔和消毒實驗室環(huán)境，包括地面、墻壁、工作臺等。

4. 儲藏與消毒：

• 無菌物品應保存在無菌包或滅菌容器內，并按消毒日期順序放置在固定的柜櫥內。

• CO?培養(yǎng)箱等設備應定期檢查、清洗和消毒，以確保其無菌狀態(tài)。

5. 個人防護：

• 實驗人員應穿戴適當的個人防護裝備，如手套、口罩等，以防止細菌或病毒的感染。

綜上所述，細胞培養(yǎng)室的無菌建設及注意事項涉及多個方面，包括無菌室的結構與布局、設備與設施、無菌操作、材料準備、通風與清潔、儲藏與消毒以及個人防護等。嚴格遵守這些要求和注意事項，可以確保細胞培養(yǎng)過程中的無菌環(huán)境，保障實驗結果的準確性和可靠性。