考馬斯亮藍(lán)染色液正確的染色步驟

描述：
常規(guī)考馬斯亮藍(lán)SDS-PAGE凝膠蛋白質(zhì)染色是實(shí)驗(yàn)室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度高，但所需試劑復(fù)雜并且有毒有害，操作步驟繁瑣，難以控制獲得好的染色效果。

考馬斯亮藍(lán)有G-250和R-250兩種。
游離狀態(tài)的考馬斯亮藍(lán)G250 在酸性溶液中呈藍(lán)偏綠色，與蛋白質(zhì)結(jié)合后呈藍(lán)色，蛋白質(zhì)含量與顏色的深淺成正比，經(jīng)595nm 測(cè)定，可作出蛋白質(zhì)含量與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。R-250呈藍(lán)色，有輕微紅色。

染色步驟：
1. 此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動(dòng)2h；也可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整時(shí)間。
2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠。
3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動(dòng)2h，（或者根據(jù)時(shí)間情況調(diào)整脫色時(shí)間）傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過(guò)程需要2～4h，也可脫色過(guò)夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景）。
4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對(duì)凝膠進(jìn)行處理后保存。

① 上樣緩沖液中包括甘油,溴酚藍(lán),SDS等,甘油主要作用是防止樣品漂浮出點(diǎn)樣孔,溴酚藍(lán)作為電泳指示劑,用來(lái)觀察電泳進(jìn)度,SDS用于一些核酸結(jié)合蛋白的變性解離.
②染色液與凝膠中核酸結(jié)合,以便于在紫外光下顯示核酸條帶.
loading buffer 的中文名字叫上樣緩沖液，6kb的緩沖液中可以顯示兩條帶，前面的紫藍(lán)色的條帶是溴酚藍(lán)，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同。
后面的藍(lán)色條帶是二甲苯氰，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時(shí)，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。而對(duì)于PAGE膠他們的遷移速率也分別不同。

安全性：
含有甲醇，無(wú)特殊毒性，按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。