探針法貓血支原體實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis

貨號：Mqt-hfe-20      規格：20個反應

貨號：Mqt-hfe-50      規格：50個反應

貨號：Mqt-hfe-100     規格：100個反應

儲存：-20度，避光保存，保質期一年。避免反復凍融。

試劑盒特點：

1，特異性檢測貓血支原體和犬血支原體，不受其他基因組干擾。

2，靈敏度高，最-低可檢出反應液中的2個基因組。

3，使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強和熱穩定性好的特點；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴增，降低背景熒光。

4，帶有陽性對照樣品，可用于檢驗試劑盒有效性。

5，帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

嗜血支原體可以感染很多哺乳動物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類。貓血支原體（Mycoplasma haemofelis），或稱為貓嗜血支原體、貓附紅細胞體，寄生于貓紅細胞表面，具多形性，可呈現為球狀、環狀或桿狀，對紅細胞有破壞作用，可引起傳染性溶血貧血癥，有時呈急性發作，可致命；有時呈慢性發作，出現嗜睡、厭食、粘膜慘白及黃疸、發燒、脾臟腫大等癥狀，并可能出現反復發作。其傳播途徑為血液傳播，包括：吸血昆蟲叮咬、咬傷、輸血等。

目前已知寄生于貓血中的支原體有三種：貓血支原體，Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。在PCR技術出現之前，這三種支原體被統稱為貓血巴爾通氏體（Haemobartonella felis）。這些細菌粘附在紅細胞表面生長，有時會給宿主造成一些疾病，尤其是在貓免疫力下降的時候。有報道約14%的貧血貓呈血液支原體陽性。貓血支原體的致病能力強于另兩種支原體。這三種支原體常發生雙重或三重感染，貓血支原體往往是檢出拷貝數最少的，因此需要單獨的檢測方法排除另兩種支原體的干擾。

寄生于犬血中的支原體有兩種：犬血支原體（Mycoplasma haemocanis，或稱犬嗜血支原體，犬附紅細胞體，舊稱Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原體與貓血支原體親緣關系非常近，形態也類似，基因組幾乎100%相同。在實驗條件下，貓可以感染犬血支原體，而犬不能感染貓血支原體。犬血支原體可能的臨床表現有：無癥狀、脫水、輕度貧血、心跳過速、黃疸、死亡，但是很少引起明顯的溶血，除非是做了脾切除手術或者發生了免疫抑制。犬血支原體是犬類中最常見的嗜血支原體，分布極為廣泛，陽性率大約在0.5-40%之間。

嗜血支原體無法在體外培養，因此難以開發蛋白類檢測方法。常用的檢測方法包括顯微鏡鏡檢法和PCR法。鏡檢法靈敏度低，實驗誤差大，無法區分支原體種類，易受血液中其他物質以及人工涂片方法的干擾，且支原體易從紅細胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優勢，且可以區分支原體種類。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以進行定量分析，而且操作更為方便，更少受環境污染的影響。

本試劑盒基于16S rRNA基因的保守區域，設計特異性引物和探針，可以準確識別貓血支原體和犬血支原體，與Candidatus Mycoplasma haemobos有微弱的交叉反應。Candidatus Mycoplasma haemobos寄生于牛血中，不會對本試劑盒的檢測產生影響。對1585個貓血樣品進行檢測，獲得45個陽性，其中有25個為與另兩種貓嗜血支原體共感染。本試劑盒適用于對貓血支原體和犬血支原體的檢測。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自極-端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經改造后較普通的Taq酶具有更強的抗抑制能力和熱穩定性。通過結合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復，因此獲得“熱啟動"功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴增效率、靈敏度和目的片段產量。

本產品僅供研究使用。

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