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探針?lè)ㄖгw污染實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination

貨號(hào):Myco-qt-20     規(guī)格:20次反應(yīng)

貨號(hào):Myco-qt-50     規(guī)格:50次反應(yīng)

貨號(hào):Myco-qt-100   規(guī)格:100次反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，保質(zhì)期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，  對(duì)柔膜菌綱（包括支原體、螺原體和無(wú)膽甾原體）有極-強(qiáng)的特異性，與柔膜菌綱以外的其他基因組無(wú)交叉反應(yīng)。可檢出歐洲藥典要求的所有支原體種類(lèi)。

2，  靈敏度高，最-低可檢出反應(yīng)液中2-86個(gè)基因組。

3，  使用熱啟動(dòng)DNA聚合酶，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4，  帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

5，  帶有UDG酶，可降低殘留污染。

支原體（Mycoplasma）,也有稱(chēng)為霉形體、霉?jié){菌或微漿菌，是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無(wú)細(xì)胞壁的原核生物，屬于柔膜菌綱(Mollicutes)，常被用作柔膜菌綱的統(tǒng)稱(chēng)。支原體具有變形能力，可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，靶向細(xì)胞壁的抗生素也對(duì)其無(wú)效。由于在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法判斷，細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染是一個(gè)令人煩惱的問(wèn)題。支原體種類(lèi)繁多，目前已知的污染細(xì)胞的支原體有20多種，一般是由試劑和人工操作帶入，95%的污染事件是由常見(jiàn)的五種支原體引起；由原代細(xì)胞的原始組織帶入而形成的污染也有發(fā)生，污染的支原體種類(lèi)分布較為廣泛。根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型、來(lái)源和培養(yǎng)方法的不同，文獻(xiàn)報(bào)道的細(xì)胞污染率在15-80%之間，極大影響了下游實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，因此必須使用專(zhuān)門(mén)的方法檢測(cè)這些污染。

傳統(tǒng)的培養(yǎng)法操作比較繁瑣，需要很長(zhǎng)時(shí)間（最長(zhǎng)需要28天），受操作人員的實(shí)驗(yàn)技能影響比較大，并且有些支原體種類(lèi)不能體外培養(yǎng)。而PCR法可有效克服上述缺點(diǎn)。本試劑盒采用探針?lè)▽?duì)細(xì)胞污染進(jìn)行PCR檢測(cè)，使用通用性探針和引物，可識(shí)別超過(guò)150種支原體。常見(jiàn)的污染類(lèi)型，如:豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）、唾液支原體（Mycoplasma salivarium）、口腔支原體（Mycoplasma orale）、精氨酸支原體（Mycoplasma arginini）、萊氏無(wú)膽甾原體（Acholeplasma laidlawii）、發(fā)酵支原體（Mycoplasma fermentans）和肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae），均可以檢出。根據(jù)易感程度和與人類(lèi)的密切程度，選取12種支原體進(jìn)行驗(yàn)證，靈敏度最高可達(dá)到每反應(yīng)2個(gè)基因組，大部分種類(lèi)靈敏度分布在每反應(yīng)2-12個(gè)基因組，最-低的是解脲脲原體，靈敏度為每反應(yīng)86個(gè)基因組。本試劑盒適用于檢測(cè)歐洲藥典要求的所有支原體種類(lèi)，大部分種類(lèi)可以達(dá)到歐洲藥典要求的10 CFU/ml的靈敏度，考慮到支原體培養(yǎng)條件和菌株活性的差異，少數(shù)種類(lèi)的支原體難以判斷是否符合這個(gè)要求。引物具有柔膜菌/支原體特異性，與真核生物無(wú)交叉反應(yīng)，即使與親緣關(guān)系較近的革蘭氏陽(yáng)性菌，如：丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）、嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）和肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae），也無(wú)交叉反應(yīng)。本試劑盒適用于細(xì)胞治療產(chǎn)品和細(xì)胞培養(yǎng)物中的支原體污染檢測(cè)，也可用作支原體通用檢測(cè)，但不適用于檢測(cè)嗜血支原體。

試劑盒包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽(yáng)性對(duì)照品。探針在5`-端以FAM修飾，3`-端以MGB修飾。DNA聚合酶源自極-端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過(guò)結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時(shí)DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)"功能。熱啟動(dòng)可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

相關(guān)產(chǎn)品：

支原體污染PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)： Myco-P-20，Myco-P-50，Myco-P-100

染料法支原體污染實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)： Myco-qs-20，Myco-qs-50，Myco-qs-100

探針?lè)ㄖгw污染實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)： Myco-qt-20，Myco-qt-50，Myco-qt-100

支原體清除劑，貨號(hào)：Myco-E-h，Myco-E-1，Myco-E-5