顯色淡，靈敏度偏低

1

 試劑盒未充分平衡

試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2

 樣品不適合做ELISA檢測

樣品一般選擇培養上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優化檢測的條件（例如稀釋液的成分）

3

 酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥

防止板過于干燥

4

 包被抗體遭到破壞

操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5

 樣本和抗體孵育條件不合適

按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。

6

 洗滌浸泡時間過長

按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；

7

 偶聯HRP試劑污染

棄去試劑，重新配置

8

 錯誤的稀釋偶聯HRP試劑

棄去試劑，重新配置

9

 TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優化孵育時間

確定合適的孵育時間：人為判定-最高濃度的標準品出現深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65

10

 樣本濃度過高或存在基質效應

建議做不同稀釋倍數，確認樣本最佳稀釋倍數。

11

 酶標儀濾光片設置有問題或者波長選擇不對

確認儀器設置及選擇正確的波長檢測。

12

 酶標板不適合做ELISA

不能使用細胞培養板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。