1. 操作步驟

（1）吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。

（2）向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。

（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消化，2~5min后把培養瓶放在 倒置顯微鏡 下進行觀察，當發現胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。

（4）吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。

（5）使用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞。

（6）用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進行培養。

（7） 細胞培養 換液時間應根據細胞生長的狀態和實驗要求來確定。一般2～3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。

2. 注意事項

（1）掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷。