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蒂科(上海)生物科技有限公司

細胞傳代培養(yǎng)小技巧

時間:2022-1-17閱讀:1287
1.細胞生長至高密度時,即須分至新的培養(yǎng)瓶中,一般稀釋比例為1:3至1:6,依細胞種類而異。
2.材料:
2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶): 以10ml分裝于15ml無菌離心管中,保存于?20℃,使用前放在37℃ 水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生
3.步驟:
3.1.附著型細胞(adherentcell)
3.1.1.吸掉舊培養(yǎng)液。
3.1.2.用D-PBS洗滌細胞一至二次。
3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用數(shù)分鐘,于倒立顯微鏡下觀察,當細胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時,吸掉或者傾倒胰酶溶液。(若沒有*去除,則在胰酶作用后,加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用)
3.1.4.輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,混和均勻后,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
3.2.懸浮型細胞(suspensioncell)
3.2.1.吸出細胞培養(yǎng)液,放入離心管中,離心1000rpm5-10分鐘。
3.2.2.吸掉上清液,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,混和均勻后,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
3.3.雜交瘤細胞
有些雜交瘤需培養(yǎng)三天以上才會產(chǎn)生抗體,若是更換培養(yǎng)基,則可能會失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基,直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細胞濃度即可。若體積太大,可傾斜放置,或分至新培養(yǎng)瓶中。

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