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幾種原代細(xì)胞傳代方法

時(shí)間:2023-6-5閱讀:947

原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的 細(xì)胞,稱(chēng)為原代細(xì)胞。


一股認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞瘍變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。

那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng),我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法:

一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代

1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。

2、加入1ml左右消化液(胰蛋白鱷或與EDTA混合液)輕輕接動(dòng)培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中.

3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí),棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞的傳代

1、直接傳代

①讓?xiě)腋〖?xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3。

②用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、離心法傳代

①將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),離心800-1 OOOrpm, 5分鐘。

②去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。

③將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


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