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了解一下激光共焦顯微鏡的發展背景
閱讀：317發布時間：2020-5-13
傳統熒光顯微鏡使用熒光物質標志細胞中的特定結構，不僅圖像與背景的對比度增強，而且由于許多熒光顯微鏡的光源使用短波長的紫外光，大大提高了分辨率(δ=0.61·λ/NA，其中δ為顯微鏡的分辨率;λ為照明光線的波長;NA為物鏡的數值孔徑)。
但當所觀察的熒光標本稍厚時，傳統熒光顯微鏡一個難以克服的缺點就顯現出來:焦平面以外的熒光結構模糊、發虛。原因是大多數生物學標本是層次區別的重疊結構(如耳蝸基底膜。
其實是外毛細胞、多種支持細胞、神經纖維等組成的空間結構)，在普通光學顯微鏡下聚焦平面的變化，會表現出不同的形態。假若熒光標記的結構在不同層次上都有分布，且重疊在一起，反射熒光顯微鏡(epifluorescentmicroscope)不僅從焦平面上收集光量，而且來自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡所接收，熒光顯微鏡的光學分辨率就要大大降低。
在傳統光學顯微鏡基礎上，激光掃描共聚焦顯微鏡用激光作為光源，采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計算機對所觀察的對象進行數字圖像處理觀察、分析和輸出。
其特點是可以對樣品進行斷層掃描和成像，進行無損傷觀察和分析細胞的三維空間結構。
同時，利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針，該技術不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可以對活細胞的結構、分子、離子及生命活動進行實時動態觀察和檢測，在亞細胞水平上觀察諸如CapH值，膜電位等生理信號及細胞形態的變化，成為形態學、分子細胞生物學、神經科學、藥理學、遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具，極大地豐富了人們對細胞生命現象的認識。
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