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當前位置：上海谷研實業有限公司>>技術文章>>質粒轉染細胞實驗操作步驟
1.1 轉化細胞細胞鋪板：將細胞按70%的匯合度接種到96孔板。
1.2 轉染：16h后轉染螢光素酶報告基因質粒和RNA，每個樣品設置6個復孔
(1)配制DNA和轉染試劑: 96孔板轉染質粒時每孔比例為pLenti：Firefly：Renilla：轉染試劑=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL
(2)稀釋好DNA及轉染試劑，常溫孵育5min
(3)將稀釋好的DNA分別和轉染試劑混勻，常溫孵育20min
(4)每孔棄去15μL培養基，將15μL DNA轉染混合液添加到每孔細胞樣品中
(5)轉染6h后，換新鮮*培養基
2 轉化細胞雙報告基因檢測
(1)質粒共轉染48h后，棄去培養基，用100μL 1XPBS洗1遍
(2)傾斜96孔板，吸干剩余的PBS
(3)去離子水將5XPLB稀釋成1XPLB，使用前放到常溫
(4)每孔加50μL稀釋好的1X PLB，搖床常溫條件下搖15min，進行裂解
(5)白色不透光的96孔酶標板中每孔加步驟4的上清液10μL，加入100μL預先混好的LAR II，2s后測數據
(6)每孔添加100μL預先混好的Stop&Glo Reagent，靜止2s后，測數據轉化細胞
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