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豬特定基因序列PCR檢測試劑盒?反應(yīng)五要素

時間:2021/10/20閱讀:395
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豬特定基因序列PCR檢測試劑盒反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

ATRNL1蛋白抗體

AFP4a蛋白抗體

鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體

鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體

β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體

早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體

磷酸化蛋白激酶AKT1抗體

磷酸化蛋白激酶AKT1抗體

ASH1L蛋白抗體

α2C-AR腎上腺素能受體抗體

中心體蛋白AZI1抗體

α蛋白激酶3抗體(心肌)

表皮型脂氧合酶3抗體(魚鱗病相關(guān)蛋白)

錨蛋白重復域28抗體

淋巴細胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體

錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體

錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體

錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體

錨蛋白重復及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白1A抗體

脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體

載脂蛋白L3抗體

腫瘤/抗原81抗體

共濟失調(diào)蛋白7樣2抗體

芳香基硫酸酯酶1抗體


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