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轉化細胞培養需要請注意的事項

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1.轉化細胞用1640加10%胎牛血清,有的種系用DMEM.血清要求質量較高,在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解,按說明加入碳酸氫鈉。

2.培養液中應加入HEPES,起緩沖pH值的作用,否則會影響細胞狀態。如果用20%的HEPES,每次配培養液時每200ml培養液可加入5ml.加入HEPES后1640培養液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。

3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度,且不要消化時間太長。也有研究者認為不用胰酶,直接吹打使細胞脫壁,但使用胰酶效果較好。消化時在鏡下觀察到轉化細胞形態稍有變化即可,不要等形態明顯變化后再停止。可以不用加血清終止消化,只要將胰酶倒出來,加上培養液吹打即可。

4.傳代密度不宜過高也不易過低,一般1瓶傳3瓶可能比較合適。

5.培養液應該適當偏酸性,在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后,pH值是不用調的。

6.轉化細胞代數越高生長越快,同時性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。

7.傳代時細胞密度在80%左右比較好,如果超過90%融合再傳會影響細胞狀態。

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