背根神經節(DRG)干細胞起源于神經嵴，NGF研究Levi-Montalcini的實驗表明，外原性NGF能刺激DRG細胞生長發育并形成廣泛的神經網絡。在體外，分離培養的神經節在NGF存在的情況下，神經突起的生長在一天之內可長達數毫米，因此，利用培養的DRG細胞，進行軸突生長發育的研究，是zui為經典而常用的方法之一。

1、材料和方法

取新生一天的大鼠(wistar種)和小鼠(昆明種)。用眼科剪在無菌條件下除去背部皮膚, 然后剪取一段脊髓,背側朝上置于滅菌毛玻璃片上,在解剖顯微鏡下沿椎管兩側水平剪除腹側一半椎骨,暴露脊髓和神經節,用解剖鑷分離出神經節。雞胚背根神經節的取材方法同前。 剝除神經節被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用種植(Plating)培養液稀釋成0.2×105 個細胞/ml密度的細胞懸液，接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養皿中,每皿2ml干細胞懸液置。置標本于36℃、10%CO2培養箱中培養。24h后傾去培養皿內種植培養液，改用飼養(Feeding)培養液培養。接種第3d, 在培養皿中分別加入細胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神經細胞的增殖, 作用48 h后更換新鮮飼養培養液，以后每周換液兩次, 每次更換一半新鮮飼養培養液。

2、培養液成份

種植培養液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清; 10%馬血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脫氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。

飼養培養液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,);5 % 馬血清; NGF 20ng/ml;神經營養素 1ml/100ml;谷氨酰胺100μg/ml。

3、新生大鼠背根節神經元的生長分化和形態特征

新生大鼠背根節神經元接種后4h,大部分干細胞可貼壁, 呈圓形或橢圓形,直徑8-14μm, 胞體周圍呈現一圈光暈。神經元的細胞核位于中央或偏于胞體一側,核仁明顯,亦可見雙核神經元。接種后24h, 大部分貼壁細胞開始長出突起。其中多數為具有多個突起的多極神經元,少數為雙極和假單極神經元, 突起細長,并可觀察到突起末端的生長錐。除單個散布的神經元外,還常見到幾個或多個神經元聚集在一起, 它們向四周發出樹枝狀的神經突起。 培養2-3d后神經元的突起逐漸增多并延長, 形成稀疏的神經網絡。隨著培養時間的延長, 神經元突起的主干和分枝明顯延長并增粗,神經突起網絡變得更加稠密, 神經元胞體逐漸增大。大鼠背根節神經元可維持培養2個月。