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細胞進行免疫熒光染色主要有兩種方法

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細胞進行免疫熒光染色,主要有兩種方法:直接法和間接法。

1.直接免疫熒光標記法的樣品制備取細胞(約1×106個/m1),在每一管中分別加入適量熒光素標記的一抗,充分混勻(如做雙標或多標染色,可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入),孵育20~60min后,用PBS洗1~2次,離心收集細胞,加入緩沖液重懸,上機檢測。直接染色法抗體較貴,但操作簡便,結果準確,適用于同一細胞群多參數同時測定。

2.間接免疫熒光標記法的樣品制備取一定量的細胞懸液(約1×106個細胞/ml),先加入特異的*抗體,待反應*后洗去未結合抗體,再加入熒光標記的第二抗體,生成抗原,抗體-抗抗體復合物,以FCM檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。本方法費用較低,二抗應用廣泛,多用于科研標本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體,特異性較差,非特異性熒光背景較強,易影響實驗結果。所以標本制備時應加入陰性或陽性對照。另外,由于間接法步驟較多,增加了細胞的丟失,不適用測定細胞數較少的標本。

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