原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存

時間：2017/5/25閱讀：5295

利用凍存技術將原代細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃／min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。
原代細胞凍存的方法：
1．細胞：選對數生長期細胞，收集細胞24小時前換液一次。
2．計數：按常規方法把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。
3．凍存液：先用培養液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱發生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：原代細胞名稱，凍存日期，以便日后查找。

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