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細(xì)胞株嚴(yán)格的消毒滅菌對(duì)保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的,其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等,后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。
①熱滅菌:玻璃器皿,160~170℃,90~120min或180℃45~60min。
②蒸氣滅菌:用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等,不同物品其有效滅菌壓力和時(shí)間不同,如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。
③濾過除菌:適于含有不耐熱成分的培養(yǎng)基和試劑的除菌,用孔徑為0.22μm微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等,用此濾膜過濾兩次,細(xì)胞株可使支原體達(dá)到某種程度的去除,但不能除去病毒。
④紫外線:紫外線的波長(zhǎng)為200~300nm,zui強(qiáng)是在254 nm,6~15平方米zui少一只紫外燈,高度要在2.5m以下,濕度45%~60%,桿菌效果好,球菌次之,霉菌、酵母菌zui差,實(shí)驗(yàn)前應(yīng)不低于30分鐘的照射時(shí)間。
⑤熏蒸消毒:當(dāng)遇有細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)多次污染,或?qū)嶒?yàn)室兩個(gè)月一次的常規(guī)消毒,均可用高錳酸鉀5~7.5g,加甲醛(40%)10~15ml,混合放入一開放容器內(nèi),立即可見白色甲醛煙霧,消毒房間需封閉24小時(shí),致少4小時(shí)以上。
⑥煮沸消毒:緊密情況時(shí)使用,金屬器械和膠蹇在水中煮20~30分鐘,趁熱傾去水分即可使用。
⑦化學(xué)消毒:化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制進(jìn)行消毒滅菌的方法。實(shí)驗(yàn)室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒殺菌。細(xì)胞株常用的有:2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、3~5%甲醛溶液、75%酒精。
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