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ELISA試劑盒實驗操作因素

時間:2019/3/7閱讀:362
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ELISA試劑盒實驗操作因素

1 加樣

加樣器是一種比較精密的工具,其在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準,因此必須定期對加液器進行維護和校準。每次加不同的標本均需更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染;加樣速度不可太快,以免將標本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡,加樣時還應注意操作時差對結(jié)果的影響,尤其對競爭法檢測結(jié)果影響更大。因此建議在加酶結(jié)合物和底物時用多道加液器,或者雙人同時加樣以減少操作時差對結(jié)果的影響,另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應。稀釋的方式非常重要,*方式是采用振蕩器混勻,不可隨意改變混勻方式。

2 溫育

2.1溫育的溫度:育常采用的溫度有43 、37℃、室溫或4℃等。37℃是實驗室中常用的溫育溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的zui適反應溫度。抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1~2 h 產(chǎn)物的生成可達,為加速反應,可在一定范圍內(nèi)提高反應的溫度并在反應過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率。抗原抗體反應在4℃更為*,形成的產(chǎn)物更多、更穩(wěn)定,但因所需時間太長,在ELISA檢測中一般不予采用。

2.2溫育的方式:溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異(即“邊緣效應”)。可將ELISA板置于水浴箱中,板底應貼著水面,使溫度迅速平衡,為避免蒸發(fā),可用塑料貼封紙覆蓋板孔。若用溫箱,ELISA板應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料(如金屬等),在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。溫育過程中每塊反應板不能重疊放置,防止溫度擴散的不均勻性。

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