久久国产精品午夜一区_91精品國產高清久久久久久91_?级毛片免费全部播放_欧美色图在线视频一区二区三区_国产综合亚洲一区二区三区_中文字幕熟女网_国产精品男人爽免费视频_九九无码网战_亚洲日本三级电影在线观看_欧美日韩DVD手机在线不卡

　　細胞裂解是改變細胞通透性和活性的重要實驗方法。主要分為化學法和機械法，前者比較溫和，后者雖然產量高，但反應更劇烈，很有可能造成細胞中的DNA斷裂。

　　這兩種方法(包括SDS 和溶菌酶處理等)提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞，同化學裂解相比，機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞，但也會造成DNA 的斷裂。

　　一、機械裂解法主要有以下兩種：

　　1.  熱休克，既反復凍溶法，是一種常用的機械裂解方式比，通常由冷凍和解凍兩部分組成。原理：由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。冷凍通常在液氮或-20 ℃冰上進行，解凍可以在37、50、65 或100 ℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。

　　2.  超聲波處理既利用超聲加熱的方法，把細胞破碎。但這種處理會導致DNA 的斷裂，所以加熱不宜過劇烈，要設定好超聲時間和間隙時間，一般超聲時間不超過5秒，間隙時間最好大于超聲時間，這些都有利于保護酶的活性。

　　二、 化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯合使用)

　　主要是裂解液處理法，細胞裂解液的主要目的有以下幾種：

　　(1)利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；

　　(2)溶解蛋白；

　　(3)蛋白變性使其穩定；

　　(4)抑制蛋白酶活性。

　　主要根據不同的目的，裂解液的組成有所不同，主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNA或DNA時，我們主要是要充分裂解細胞，得到更多的核酸；如果我們的目的是蛋白，那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液，在提取蛋白后，再根據實驗需要復性蛋白等。