久久国产精品午夜一区_91精品國產高清久久久久久91_?级毛片免费全部播放_欧美色图在线视频一区二区三区_国产综合亚洲一区二区三区_中文字幕熟女网_国产精品男人爽免费视频_九九无码网战_亚洲日本三级电影在线观看_欧美日韩DVD手机在线不卡

北京百奧創新科技有限公司

siRNA轉染

時間:2022-5-7 閱讀:2080
分享:

siRNA轉染

1. siRNA導入細胞的方法

siRNA導入細胞的方法有化學轉染技術、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術、顯微注射和載體導入技術。技術的選擇要考慮轉入時細胞的承受能力、細胞對病毒感染的敏感性、細胞生長特性等實驗條件的限制對于貼壁細胞來講化學轉染技術比較合適,而對于懸浮細胞,電穿孔更有效。

2. 轉染試劑的選擇

在選擇轉染試劑時,首先考慮的是特定的細胞株,而不是被導入細胞中的物質。在試劑的選擇上建議選擇線性PEI轉染試劑。

3. 篩選轉染試劑

好的轉染試劑有以下特點:如下表

特性

程度

實例

毒性

對細胞的毒性小。

轉染率

siRNA轉染過程中有較高成功

導入效果

準確

mRNA水平檢測siRNA導入的效果比用看家基因的siRNA陽性對照檢測更準確

4. 細胞在轉染過程中死亡的處理方法

如果細胞在轉染后大多數死亡那就說明轉染條件不適合細胞生存,需要進行進一步的優化。在優化轉染條件時需要考慮因素:轉染試劑(線性PEI轉染試劑)和細胞特異性條件。例如:siRNA與轉染試劑的比例、轉染時間、細胞傳代數和細胞密度等。

 

5. 提高難以轉染的細胞轉染效率的方法以及轉染效率的確定

如何提高難轉染細胞的轉染效率是目前研究的一個技術題。一般推薦使用電轉移法,該方法對細胞的損傷比較大,所以這種方法不太合適。熒光標記siRNA是熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和流式細胞術常用的檢測轉染效率的方法。

6. 轉染后細胞死亡的原因及轉染條件的優化

死亡原因

解決策略

如何優化轉染條件:包括轉染前調整細胞密度、轉染濃度檢測時間等。

 

脂質體毒性

優化轉染條件

轉染濃度過高

轉染前的細胞狀態不佳

選擇像線性PEI轉染試劑這種毒性小的轉染試劑也可以達到優化轉染條件的目的。外,如果siRNA靶向的基因對維持細胞生長非常重要,那么細胞死亡的現象可能是由基因干擾。如果檢測受到細胞死亡的影響,可以適當調整檢測時間。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話 產品分類
在線留言
主站蜘蛛池模板: 略阳县| 云和县| 台前县| 威海市| 枣庄市| 周至县| 溆浦县| 新民市| 贺兰县| 大关县| 香河县| 平昌县| 台湾省| 休宁县| 日照市| 子洲县| 琼结县| 咸宁市| 嘉祥县| 阜南县| 阿鲁科尔沁旗| 安徽省| 陵川县| 卢龙县| 英山县| 景泰县| 沈丘县| 岢岚县| 高碑店市| 固始县| 无为县| 通许县| 茂名市| 筠连县| 梅州市| 陵川县| 于都县| 云梦县| 天长市| 宿迁市| 汤原县|