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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測試劑盒微量法

2021-4-27  閱讀(1128)

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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測試劑盒微量法
測定意義: PEPCK(EC 4.1.1.32)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸,是調節糖異生途徑的關鍵酶。

測定原理:PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PEPCK活性。

需要的儀器,耗材:分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測試劑盒微量法
樣本處理
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液) 進行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清,置冰上待測。


細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體 積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功 率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

血清(漿)樣本:直接檢測。

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