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技術(shù)文章

氣單胞菌通用PCR試劑盒樣品 DNA 的制備

閱讀:291          發(fā)布時(shí)間:2020-5-21

氣單胞菌通用PCR試劑盒樣品 DNA 的制備:

1. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。如果用本試劑盒自帶的DNA 釋放劑試用裝。則按下面步驟操作:

3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足夠 10 個(gè)樣品)為例:在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水,充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置,但*在一周內(nèi)用完,不要長(zhǎng)期放置。一次檢測(cè)一個(gè)樣品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足夠 10 個(gè)樣品。如果待測(cè)樣品數(shù)量為其他數(shù)字,配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。

4. 在標(biāo)記好的 N+2 個(gè)離心管中,加入 1-5mg 固體樣品(半粒芝麻大小)或 5uL 液體樣品待測(cè)樣品。在樣品制備陽(yáng)性對(duì)照中加入 5uL 陽(yáng)性對(duì)照,在樣品制備陰性對(duì)照中加入 5uL 水。

5. 在每個(gè)管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩混勻。

6. 95℃保溫 10 分鐘。

7. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。每個(gè)樣品得到的 DNA釋放液足夠進(jìn)行 50-100 次 PCR。

 

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