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腫瘤細(xì)胞在大多數(shù)甲醛固定的組織在開始染色之前都需要先修復(fù)抗原，這是由于在固定過(guò)程中產(chǎn)生了亞甲基橋使蛋白之間交聯(lián)屏蔽了抗原位點(diǎn)。兩種抗原修復(fù)方法為熱修復(fù)法（稱之為熱誘導(dǎo)抗原表位修復(fù)或HIER）和酶解法。這些修復(fù)方法原理都是將亞甲基橋打斷，使抗原表位暴露出來(lái)，以便于抗體結(jié)合。有的抗原適合酶解修復(fù)，有的抗原適合熱修復(fù)。酶解修復(fù)有時(shí)會(huì)損壞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，因此需要摸索酶濃度和作用時(shí)間。
熱抗原修復(fù)方法有高壓蒸汽法、微波法或蒸煮鍋法。或者將玻片置于修復(fù)溶液中60°C水浴過(guò)夜。除非抗原修復(fù)方法在抗體數(shù)據(jù)表中可以找到，否則必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定適宜的修復(fù)。
熱修復(fù)緩沖液：
1）枸櫞酸鈉緩沖液(10 mM Sodium Citrate, 0.05% 吐溫- 20, pH 6.0)；
2）1 mM EDTA, 調(diào)至pH 8.0；
3）Tris/EDTA 緩沖液(10mM Tris, 1 mM EDTA 溶液, 0.05% 吐溫-20, pH 9.0)。
對(duì)于一個(gè)特定的抗體，在沒(méi)有其他研究者建議的情況下，腫瘤細(xì)胞要通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定選用哪種修復(fù)緩沖液。
熱修復(fù)法，使用的修復(fù)液、處理的方法、溫度和時(shí)間都需要適當(dāng)?shù)拿鳌?br />500G    一水醋酸鈣        CALCIUM ACETATE, MONOHYDRATE        
500G    鹽酸胍        GUANIDINE HYDROCHLORIDE        22919-26-2
5 KG    鹽酸胍        GUANIDINE HYDROCHLORIDE        492-62-6
1 Kg    亞硝酸鈉        SODIUM NITRITE        
2.5 KG    亞硝酸鈉        SODIUM NITRITE        
100G    亞氯酸鈉        SODIUM CHLORITE        
1 Kg    亞氯酸鈉        SODIUM CHLORITE  
腫瘤細(xì)胞