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液相色譜儀成為解決生化分析問題有前途的方法
閱讀：928 發布時間：2021-11-29
隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離，液相色譜儀成為解決生化分析問題有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。
液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。質譜連用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等，液相色譜儀連用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發烴類，使環境污染分析得到新的發展。
液相色譜儀只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
液相色譜儀3大系統各自的組成與特點：
1、輸液系統：該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47～4.4X10Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質都能獲得有效分離。
2、分離系統：該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm，內徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，柱內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點，加之其表面經過機械涂漬，或者用化學法偶聯各種基因或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。
3、進樣系統：液相色譜儀一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
與試樣預處理技術相配合，所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
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