Qustions&解答Answers

Seahorse XF 實驗常見問題及解答

01可以使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板嗎？

     Agilent 無法保證因使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板而得到的實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量(有效性)，為得到最佳的、最真實的數(shù)據(jù)，請使用有效期內(nèi)的探針板及其它消耗品。

02探針板水化超出水化時間怎么辦？

     Agilent建議將探針板放入37℃無CO2培養(yǎng)箱中水化過夜以得到*結(jié)果。最短水化時間是37℃水化12小時。探針板最長水化時間是37℃水化72小時，但由于液體蒸發(fā)需要補充(或更換)校準液，因此37℃無CO2培養(yǎng)箱務(wù)必放置水盤保證濕度。

03Fluxpak各種探針板有什么區(qū)別？

     探針板是Fluxpak的組成部分，一個Fluxpak包含探針板、水化板、校準液和細胞培養(yǎng)微孔板。以上各消耗品數(shù)量因所購Fluxpak類型而不同。探針板不能單獨訂購，必須通過訂購Fluxpak來購買，但細胞培養(yǎng)板和校準液可單獨購買。訂購前，需要了解使用機器的型號及所需要的實驗次數(shù)，訂購與之配套的Fluxpak。

04計劃明天做實驗，我今天要做些啥？

     實驗前一天，打開主機，打開電腦，同時點開Wave軟件，確保是Connected的狀態(tài)，水化探針板，貼壁細胞提前接種到Seahorse的細胞培養(yǎng)板里。

05探針板水化聽說有二步，是這樣嗎？

     是的，96孔探針板，實驗前一天，用無菌水；第二天做實驗前，棄去無菌水，更換上37℃預(yù)熱好的校準液，再放置無CO2恒溫箱孵育1小時，這樣二步法水化，避免了探針頭上的小氣泡；24機型探針板一步法水化即可，但是還是建議用之前手動排一下氣泡；

06一次實驗可以只使用探針板其中的一部分嗎？

     為了將所有藥物或化合物成功地注入細胞培養(yǎng)孔中，Agilent建議水化整個探針板并因需要將相同字母標注的全部加藥孔注入藥物（請參考實驗流程中關(guān)于加載藥物的注意事項）。背景孔的加藥孔也必須加上藥物，保證所有的A加藥孔體積一致，B、C、D孔同理，否則會造成打藥失敗；

07實驗中為何必須設(shè)置背景校正孔？

     背景校正孔被用來過濾掉實驗的干擾因素，比如溫度和 buffering capacity，這些干擾因素會影響氧含量和pH變化（非來源于代謝變化的影響）。背景校正孔還能被用來修正整板間溫度波動，來診斷潛在溫度問題，以及作為實驗獲得非期望數(shù)據(jù)時原因篩查的切入點。

08背景校正孔怎么設(shè)置？

      背景校正孔里除了沒有細胞，其它所有操作和細胞孔一致。96機型背景校正孔（A1,A12, H1, H12，即4個角）不接種細胞；24機型背景校正孔設(shè)置為（A1, B4, C3, D6）；確保背景校正孔中只加入培養(yǎng)液（無細胞）

09為何細胞培養(yǎng)板需要在 37℃無CO2 培養(yǎng)箱中放置45-60min？

     細胞培養(yǎng)板在37℃無CO2培養(yǎng)箱中孵育45-60min的目的是為了脫氣，釋放CO2。

10 Seahorse 實驗時，我擔(dān)心細胞量少，我多種點細胞可以嗎？

     細胞的密度需要摸索，在實驗上機前，長滿板底面積80-90%為最佳，設(shè)置一個密度梯度，找到最佳的密度；細胞過密會使檢測時形成的瞬間微室氧氣快速耗盡。

11 Seahorse 實驗，種細胞和平時種細胞有區(qū)別嗎？

      安捷倫細胞培養(yǎng)板種細胞時候，槍頭抵壁，與水平面呈45°角度加入，加完在超凈臺靜置1小時，有助于促進細胞均勻分布并減少邊緣效應(yīng)。96孔細胞板種80ul；24機型的板子分二步，先每孔接種100 μL細胞懸液，培養(yǎng)細胞1-6小時，細胞貼壁后，再補充生長培養(yǎng)基，每孔加入150μL生長培養(yǎng)液,總體積為250 μL。加液時沿壁輕輕加入，避免吹起剛貼壁的細胞。 

12 使用組織黏附劑處理細胞培養(yǎng)板會影響XF實驗測量嗎？

     不會。使用諸如poly-L-Lysine，fibronectin，Gelatin，poly-D-lysine，Cell-Tak™等組織黏附劑處理細胞培養(yǎng)板時，不會影響XF儀器測量的效果及實驗參數(shù)分析。

13 XFp/XFe96細胞培養(yǎng)微孔板的每個細胞孔的最大體積及底面積是多少？

       275 µL；底面積是正常96孔板底面積的40%。

14 XFe24細胞培養(yǎng)微孔板的每個細胞孔的最大體積及底面積是多少？

      1000 µL；底面積和正常96孔板底面積一樣大小。

15 Seahorse XF檢測液中需要加入抗生素嗎？

      無需加入抗生素，因為大部分XF實驗在幾小時內(nèi)就結(jié)束了。