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技術文章

Taq DNA聚合酶的分類

閱讀:5036          發布時間:2017-12-13

Taq DNA聚合酶有幾種,除了普通擴增用的Taq DNA聚合酶外,還有以下幾種特意性Taq DNA聚合酶
a,保真性的一個通用標準是錯配率,錯配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的錯配率在 10 -5 堿基 / 循環數,而高保真 Taq 酶錯配率可降到 10 -6 數量級,大大降低了出錯的可能性;它適合對 PCR 保真性要求較高的實驗,如基因篩選、測序、突變檢測等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘ 到 5’ 核酸外切酶的活性。目前市面上主要有兩類產品:一類是混合型的高保真酶,將帶有 Proofreading 活性的酶與普通 Taq 酶(用于提高擴增效率)混合起來;另一類是單一型的高保真酶。
b,熱啟動Taq酶(高特異Taq酶):在 PCR *個循環變性之前,有一個升溫的過程,引物和模板會有一些非特異性配對,如果這時 Taq 酶發揮活性,就很容易產生非特異性擴增,由于循環初期模板量非常少,產生的非特異性條帶經過后面的指數擴增,就會嚴重干擾目的片段的擴增,甚至導致特異性條帶不能擴出;而熱啟動 Taq 酶是必需經過高溫才能激活的酶,因此在初始循環的變性之前它沒有活性,不會產生非特異性擴增,這就大大提高了 PCR 擴增的特異性。
c,高耐熱Taq酶: 對于有些模板變性溫度較高,需要時間較長,可能要求高耐熱性 Taq 酶,如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列,兩者都是從海底火山口分離出來后克隆的,是普通 Taq 酶耐熱性的三倍以上,前者在 95°C 半衰期近 7 小時, 100°C 近 2 小時;而后者分別為 23 小時和 8 小時。
d,超長片段擴增Taq酶:對于作基因組圖譜、測序及分子遺傳學研究的科研人員,可能會用到超長片段的擴增, Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶, Proofreading 酶和熱啟動抗體,對復雜模板可擴增 10kb 片段,簡單模板可達 40kb 。

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