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高效微流電動液相色譜系統與電噴霧電離質譜聯用分析肽和蛋白質

閱讀:284        發布時間:2019-12-06
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    上海通微分析技術有限公司

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  毛細管電色譜(CEC)結合了毛細管電泳(CE)分離效率高和毛細管液相色譜(cHPLC)選擇性多和樣本容量大的特點。然而,通過商用CE儀器,在沒有壓力的情況下運行CEC系統時,會出現與氣泡形成和柱干燥等有關問題和困難。這些問題可以通過高效微流電動液相色譜系統(eHPLC)解決,其中流動相由壓力流和電滲透流(EOF)共同驅動。在此系統中,壓力作用于毛細管柱以抑制氣泡的形成。eHPLC可以通過旋轉式注射器實現定量進樣。EOF可以與壓力流方向相同,也可以與壓力流方向相反。因此,可以控制樣品的洗脫順序。更重要的是,通過改變洗脫液的組成,可以使用類似于高效液相色譜法的溶劑梯度模式。基于eHPLC系統,CEC的優勢就可以得到充分利用。
 
  質譜(MS)為各種樣品提供了高靈敏度和可靠的檢測,特別是在樣品數量非常有限的生物化學應用分析中。此外,MS還提供了有關分析物結構和特征的重要信息。因此,eHPLC-MS在生物樣品分析中起著重要的作用。然而,eHPLC和MS之間的接口可能會影響儀器的性能。在所有已開發的接口中,電噴霧電離(ESI)的接口允許在低質量掃描范圍內對質量高達幾十萬的大生物分子進行質譜分析,并且其適合與HPLC、CE、CEC、eHPLC等聯用。
 
  我們使用相同的實驗裝置進行了cHPLC-ESI-MS和eHPLC-ESI-MS,從實驗和理論兩方面研究了eHPLC中電解質濃度和pH對ESI-MS信號強度的影響,還研究了施加電壓和有機改性劑對肽分離的影響。通過對胰蛋白酶分解形成的肽段、蛋白質和修飾蛋白的分析,證明了eHPLC-ESI-MS系統的功能。
 

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