在生物學(xué)研究過程中常常需要檢測細(xì)胞凋亡情況。目前至少有十?dāng)?shù)種檢測細(xì)胞凋亡的方法,大致可分為基于細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標(biāo)記三大類。那接下來就來說一下Annexin V-細(xì)胞凋亡檢測方法。

Annexin V凋亡檢測原理：

當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)首先出現(xiàn)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的改變。其中在正常情況下，細(xì)胞膜中磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）通常存在于內(nèi)表面，而在細(xì)胞發(fā)生凋亡的過程中，PS會(huì)外翻、轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外層。因此可以通過該現(xiàn)象，利用檢測磷脂酰絲氨酸的方法，檢驗(yàn)細(xì)胞是否發(fā)生凋亡。

Annexin V是膜聯(lián)蛋白的一種，其功能目前尚不明確，但Annexin V已知可在鈣離子存在的情況下與磷脂酰絲氨酸高親和力結(jié)合。利用該特點(diǎn)，使用熒光或其他偶聯(lián)標(biāo)記標(biāo)記的Annexin V即可檢測細(xì)胞膜表面暴露的PS。

由于細(xì)胞在晚期凋亡或死亡后細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞，此時(shí)Annexin V可以隨意進(jìn)出細(xì)胞，染色呈陽性，這就造成與我們關(guān)注的早期凋亡事件無法區(qū)分。而在細(xì)胞早期凋亡時(shí)，細(xì)胞膜完整性尚未破壞，此時(shí)非浸透性熒光染料如7-AAD或PI無法進(jìn)入細(xì)胞，染色呈陰性。因此結(jié)合Annexin V和7-AAD/PI染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測，即可區(qū)分早期凋亡和晚期凋亡/死亡細(xì)胞。

艾美捷/Annexin V 是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合，是檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

艾美捷/Annexin V組成成分：

以上，就是有關(guān)艾美捷/Annexin V-細(xì)胞凋亡檢測的相關(guān)解決方案了。