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技術文章

原代細胞免疫熒光鑒定步驟

閱讀:626          發布時間:2018-9-20

為了更好的幫助客戶提供真實的原代細胞,使用免疫熒光鑒定出提取的細胞類型,免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。該技術的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。 一下是賽百慷技術人員提供的免疫熒光細胞鑒定的步驟,僅做參考:

      1.細胞爬片
      取4片玻璃片于24孔板中,每孔加入培養基1mL,加入細胞0.02million個/孔。置培養箱2h或過夜。
      2.固定
      細胞爬片后,吸出培養基,用PBS洗一遍,加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可后一次不吸出PBS,放4℃過夜。
      3.破膜封閉
      將玻片除去水分,置于培養皿支撐物上,
      玻璃片封閉液配置:0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合,再加10% 血清,
      取50uL破膜封閉液滴于防水膜上,將玻片上有細胞的一面蓋上2h。
      4.一抗孵育
       一抗配置:抗體與PBS 1:100(200)稀釋
      破膜后,取50uL一抗于防水膜上(濕盒中),將玻片有細胞的一面蓋上置于4℃(多可放置一周)
      陰性對照組可用PBS代替一抗。
      5.二抗孵育
      PBS洗3×5min/次,
      二抗混合液配置:二抗:PBS=1:500
                                    DAPI:PBS=1:1000
      防水膜上滴50uL二抗混合液,蓋上玻片,避光,室溫放置2h。
      6.包埋

      PBS洗3×5min/次,玻片上各滴1滴Fluoromount-G,將有細胞的一面蓋上。

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