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甲型肝炎病毒 RT-PCR 檢測試劑盒
閱讀：357 發(fā)布時間：2019-8-19產品及特點
甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus，HAV)會引起甲型肝炎，該病毒病毒主要通過糞、口途徑傳播，傳染源多為病人。甲型肝炎的潛伏期為 15～45 天，易感群體多為兒童及青年，發(fā)病率隨年齡增長而遞減，感染后臨床表現多從發(fā)熱、疲乏和食欲不震開始，繼而出現肝腫大、壓痛、肝功能損害，部份患者可出現黃疸。該病毒的感染對人體健康有較大損害，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產品，可用于在科研領域快速定量檢測甲型肝炎病毒。它具有下列特點：
1.一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2.根據甲型肝炎病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3.靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4.使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產品足夠 50 次 30μL 體系的 RT-PCR。
規(guī)格及成份
注：為避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供甲型肝炎病
毒專一的 DNA 片段作為陽性對照。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分
開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑
樣品 RNA
使用方法
一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?/span> 10μL 甲型肝炎病毒 PCR 陽性
對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備TE 溶液中，充分混勻，此為 100倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網站搜索天凈沙核酸釋放劑或產品編號 61202 下載。
二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）
2. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR
陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
成份 | N+2 個 樣品管 | RT-PCR 陰性對照 | RT-PCR 陽性對照 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個制備的樣品 | 各 12.5 μL | 不加 | 不加 |
甲型肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照 10000 倍稀釋液 | 不加 | 不加 | 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4.上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉錄 | 42℃ | 60 分鐘 |
預變性 | 95℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應 （35 個循環(huán)） | 95℃ | 30 秒 |
55℃ | 30 秒 | |
72℃ | 30 秒 | |
延伸 | 72℃ | 5 分鐘 |
5.瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預期得到的擴增產物長度為 192bp。如果陰性對照有此擴增產物或陽性對照無此擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產物、陽性對照有此擴增產物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有此擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。
關聯產品 甲型肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測試劑盒
本產品只能用于科研，不能用于臨床。