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谷丙轉氨酶（GPT）測試盒
閱讀：491 發布時間：2020-11-6谷丙轉氨酶（GPT）活性測定試劑盒說明書
微量法 100 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化氨基酸和酮酸轉氨
基反應，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動物肝細胞 GPT 活性很高，當肝細胞
壞死，GPT 釋放到血液中，血清 GPT 活性顯著增高。因此，GPT 被世界衛生組織推薦為肝
功能損害敏感的檢測指標。
測定原理
GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸發生轉氨基反應，生成丙酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝基苯
肼溶液，不僅終止上述反應，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件
下呈紅棕色，可以在 505nm 讀取吸光值并計算酶活力。
試驗中所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑三：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存；
樣品測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量
（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提
取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；
8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 505nm，蒸餾水調零。
2、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱（μL） 測定管 對照管
待測樣本 10
試劑一 25 25
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）預熱 30min
試劑二 25 25
待測樣本 10
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準確反應 20min
試劑三 240 240
混勻，室溫（25℃）放置 10min，在 505nm 波長處測各管吸光度。每個測定管需設一
個對照管。
計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、以相對吸光值（A 測定管-A 對照管）為橫坐標，相應酶活力單位（U/L）為縱坐標。作
標準曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
3、微生物、細胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測勻
漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、以相對吸光值（A 測定管-A 對照管）為橫坐標，相應酶活力單位（U/L）為縱坐標。作
標準曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.964
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
3、微生物、細胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測勻
漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測定管-A 對照管。