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WB內(nèi)參選擇知多少？
閱讀：1862 發(fā)布時間：2021-2-20免疫印跡技術 (Western blotting, WB) 是蛋白定性和定量的金標準，因此廣泛應用于生物學研究。由于Western blot檢測包含多個步驟，樣品制備、上樣或轉(zhuǎn)膜等實驗過程中任何細微的差異，都可能導致實驗結論的不一致性，甚至*相悖。為了避免實驗操作差異引起誤差，在任何WB檢測實驗中，都需要設定合適的內(nèi)參。
WB常見的應用是研究生物樣品中蛋白質(zhì)豐度的變化。內(nèi)參的信號通常用來對目的蛋白的信號進行標準化，需要強調(diào)的是內(nèi)參抗體應該與實驗抗體在相同的印跡上進行。因此選擇的內(nèi)參蛋白必須是實驗樣本中穩(wěn)定表達的蛋白，一般會選擇組成型表達且是細胞基本功能必需的管家蛋白如細胞骨架蛋白作為內(nèi)參。但是進一步的研究表明，管家蛋白的表達并不恒定，會因?qū)嶒灄l件的改變而改變。
選擇內(nèi)參應遵循以下原則
表達水平：內(nèi)參蛋白應在實驗樣本中高表達；
豐度相似性：實驗樣本中內(nèi)參蛋白的表達豐度應與目的蛋白的豐度有相似性，實驗方案和檢測方法可以揭示內(nèi)參蛋白和目標蛋白水平的變化，而不會出現(xiàn)信號飽和；（如果內(nèi)參蛋白的表達水平遠遠高于目的蛋白，必須對內(nèi)參蛋白進行梯度稀釋以確定內(nèi)參蛋白的檢測范圍）。
內(nèi)參蛋白有多種多樣的選擇，隨機選擇beta-Actin或alpha-Tubulin作為內(nèi)參并不能滿足所有的WB實驗，對于不同特性的WB，尋找合適的內(nèi)參是特定WB成功的關鍵。我們在這里列出了內(nèi)參選擇需要遵循的原則以便大家更好的選擇合適的內(nèi)參。
選擇內(nèi)參應遵循以下原則
穩(wěn)定表達：在特定實驗條件下（如特殊的實驗處理或不同的發(fā)育階段），內(nèi)參蛋白的水平相對于總蛋白保持恒定；
表達水平：內(nèi)參蛋白應在實驗樣本中高表達；
豐度相似性：實驗樣本中內(nèi)參蛋白的表達豐度應與目的蛋白的豐度有相似性，實驗方案和檢測方法可以揭示內(nèi)參蛋白和目標蛋白水平的變化，而不會出現(xiàn)信號飽和；（如果內(nèi)參蛋白的表達水平遠遠高于目的蛋白，必須對內(nèi)參蛋白進行梯度稀釋以確定內(nèi)參蛋白的檢測范圍）。
