化工儀器網
技術文章
免疫組化問題解答
閱讀：529 發布時間：2021-3-91、染色過強？
- 原 因
- 解決方法
- 抗體濃度過高或孵育時間過長
- 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜
- 孵育溫度過高超過37度
- 一般在室溫20-28度
- DAB顯色時間過長或濃度過高
- 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準
2、非特異性背景染色？
- 原 因
- 解決方法
- 操作過程中沖洗不充分
- 每步沖洗3次每次5分鐘
- 組織中含過氧化物酶未阻斷
- 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
- 組織中含內原性生物素
- 正常非免疫動物血清再封閉
- 血清蛋白封閉不充分
- 血清蛋白封閉不充分
3、染色弱？
- 原 因
- 解決方法
- 抗體濃度過低、孵育時間過短
- 提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘
- 試劑超過有效使用時間
- 應更換試劑
- 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干
- 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應防止切片干燥） - 室溫太低，低于15度
- 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜
- 蛋白封閉過度
- 封閉不要超過12分鐘
4、染色陰性？
- 原 因
- 解決方法
- 操作步驟錯誤
- 應重試，設陽性對照
- 組織中無抗原
- 設陽性對照以驗證試驗結果
- 一抗與二抗種屬連接錯誤
- 仔細確定一抗二抗種屬無誤