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Western Blotting 問題解答
閱讀：315 發布時間：2021-3-101、膠片上存在反轉印象（如：亮的條帶、黑的背景）？
原因：HRP的濃度過高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
2、膜上有黃色或棕色的沉積？
原因：HRP的濃度過高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
3、在暗室中條帶過于明亮？
原因：HRP的濃度過高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
4、條帶的發光時間持續了至少8小時？
原因：HRP的濃度過高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
5、信號太弱或沒有？
原因：
1.太多的HRP積聚導致信號快速的消退；
2.抗原或抗體的濃度不夠；
3.轉印不成功；
4.HRP或其他底物的效價降低。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.增加其濃度；
3.尋找合適的轉移方法和條件；
4.選擇其他的合適底物。
6、背景高？
原因：
1.HRP濃度過高；
2.封閉無效；
3.不適合的封閉試劑；
4.洗滌不充分和洗滌液的量；
5.膠片曝光過度；
6.抗原或抗體的濃度太高。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.尋找合適的封閉方法；
3.選用其他的封閉試劑；
4.增加洗滌的時間,次數；
5.減少曝光時間；
6.稀釋抗原或抗體。
7、蛋白質條帶上有空泡影像？
原因：
1.蛋白質沒有被充分轉印；
2.膜沒有預先浸濕；
3.在膠片和膜之間有氣泡。
解決：
1.尋找合適的轉移方法和條件；
2.在轉印前充分浸濕；
3.在暴光之前趕走氣泡。
8、膠片上背景彌散？
原因：HRP標記的抗體出現了積聚；
解決：稀釋HRP至少10倍。
9、無特異性條帶？
原因：
1.HRP濃度過高；
2.SDS促使非特異蛋白質條帶黏附在目的蛋白質條帶上。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.在操作過程中不要加SDS。