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       目前，免疫學檢驗中的標記技術(shù)主要包括酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學發(fā)光免疫技術(shù)等。其中酶免疫技術(shù)是以酶標記的抗體（抗原）作為主要試劑，將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的性和專一性結(jié)合起來的一種免疫檢測技術(shù)。作為經(jīng)典的三大標記技術(shù)之一，酶免疫技術(shù)在檢驗醫(yī)學中得到廣泛應(yīng)用并不斷得到更新。

一、常用的酶及顯色底物

　　在酶免疫技術(shù)中用于標記的酶應(yīng)具有催化活性高、催化專一性強；與抗原抗體偶聯(lián)后不影響抗原抗體的免疫反應(yīng)性和酶活性；催化的底物易于配制、保存且催化底物產(chǎn)生的信號產(chǎn)物易于觀察和檢測；對人無害且價廉、易得等特點，目前常用的酶及底物見表1。

表1 常用酶及底物

常用酶 底物 加終止液前顏色 加終止液后顏色

辣根過氧化物酶（HRP） 鄰苯二胺（OPD） 橙黃色 棕黃色

RZ>3.1 四甲基聯(lián)苯胺（TMB） 藍色 黃色

堿性磷酸酶（AP） 對硝基苯磷酸酯（p-NPP） 黃色 黃色

二、標記物的制備

　　在酶免疫技術(shù)中制備標記物的抗原應(yīng)純度高、抗原性完整；制備標記物的抗體應(yīng)特異性好、效價高、親和力強、比活性高、能批量和易于分離純化。

　　制備酶標記物的方法應(yīng)符合簡單、產(chǎn)量高；避免酶、抗體（抗原）、酶標記物各自形成聚合物；標記反應(yīng)不影響酶的活性和抗原抗體的免疫反應(yīng)性等原則。標記物制備的方法基本屬于兩類：

（一） 交聯(lián)法

　　交聯(lián)法是以一可同時與酶和抗體（抗原）結(jié)合的 交聯(lián)劑作為“橋”，分別連接酶與抗體（抗原）的方法，此類方法中目前zui常用的是戊二醛交聯(lián)法，形成的結(jié)合物為：酶-戊二醛-抗體（抗原）

（二） 直接法

　　直接法是用一活化劑首先將酶活化，被活化的酶分子上的基團直接可與抗體（抗原）結(jié)合形成標記物，如過碘酸鈉法。形成的結(jié)合物為：酶-抗體（抗原）。

三、酶免疫技術(shù)類型

　　酶免疫技術(shù)按照抗原抗體系統(tǒng)是定位于組織細胞上還是存在于液體樣品中分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定（EIA），酶免疫測定又可分為均相酶免疫測定和異相酶免疫測定。