化工儀器網
技術文章
鼠抗人Bcl-0單克隆抗體操作步驟
閱讀：256 發布時間：2022-6-14鼠抗人Bcl-0單克隆抗體操作步驟:
1 . 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer (酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注: HRP Polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復染 ,脫水,透明,封片。
NCI-H661(人大細胞肺癌細胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)
PA319(人大腸癌細胞)
PATU8988(人胰腺癌細胞)
PC-3M(人前列腺癌細胞)
SF-295(人XG惡性膠質瘤細胞)
SMC-1(人胸膜瘤細胞)
SW1116(人結腸腺癌細胞)
TE-13(人食管癌細胞)
TG-905(人腦膠質母細胞瘤細胞)
VE(人血管內皮細胞)
MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)
WTRL1(大鼠肺細胞)
Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細胞)
293E(人胚腎細胞（EBNA1基因修飾）)
293ET(人胚腎細胞（SV40T和EBNA1基因修飾細胞）)
293FT(人胚腎細胞)
2V6.11(人胚腎細胞)
A3(人T淋巴細胞白血病細胞)
A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)
AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞)
B16-F1(小鼠黑色素瘤細胞)
B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)