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雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)操作步驟如下：

1 液體石蠟的準備 選用優質化學純液體石蠟，將液體石蠟分裝加塞，用牛皮紙包好，采用以下兩種方式進行滅菌：121℃濕熱滅菌30min，置40℃恒溫箱中蒸發水分，經無菌檢查后備用。160℃干熱滅菌2個小時，冷卻后，經無菌檢查后備用。

2 斜面培養物的制備   參照定期移植法。

3 灌注石蠟  將無菌的液體石蠟在無菌條件*入培養好的新鮮斜面培養物上,液面高出斜面頂部1cm左右，使菌體與空氣隔絕。

4 保藏 4.1　注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態置低溫（4～6℃）干燥處保藏，保藏時間2～10年。 4.2　保藏期間應定期檢查，如培養基露出液面，應及時補充無菌的液體石蠟。

5 恢復培養   恢復培養時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長繁殖后，再重新轉接一次。

培養及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養基試管中，并在建議的條件下培養。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續兩次繼代培養才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。