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技術(shù)文章

細(xì)胞株形態(tài)是否正常

閱讀:528          發(fā)布時(shí)間:2018-7-26

     不管是有經(jīng)驗(yàn)或是剛剛從事細(xì)胞株培養(yǎng)工作的人員都應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)地詢問下細(xì)胞提供方提供的建議,提前了解所要培養(yǎng)細(xì)胞的詳細(xì)資料,準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑。zui近好多客戶打來,問到有關(guān)細(xì)胞在收到后應(yīng)該怎么處理的正確方法,今天我們恒遠(yuǎn)生物科技就針對這個(gè)問題提出以下一些建議:

1.收到細(xì)胞,時(shí)間要鏡檢:觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度,有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會(huì)發(fā)生大片的脫落,細(xì)胞聚集在一起,但是細(xì)胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。
2.當(dāng)通過上一步的觀察,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí),進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí),則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下,會(huì)調(diào)整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。
3.如果經(jīng)步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞株而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細(xì)胞比較薄,狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型,一次少傳些,保證每瓶細(xì)胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞,次處理也可以依照第二種情況。

 phospho-Dnmt1 (Ser154) 核呼吸因子-1抗體

 phospho-Dnmt1 (Ser714) 核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體

 phospho-Dnmt1 (Tyr399) 核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1

 phospho-DOK1 (Tyr362) 含氧酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶1抗體

 phospho-DOK1 (Tyr398) 含纈酪肽蛋白抗體

 Phospho-Doublecortin (Ser297) 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體

 phospho-E2F1 (Ser332) 過氧化氫酶抗體

 phospho-E2F1 (Ser337) 過氧化酶活化增生受體γ抗體

 phospho-E2F1 (Ser364) 過氧化還原酶5/6抗體
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